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主题:菌株论文写作 时间:2024-02-09

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摘 要:从香菇8号和香菇L26子实体中分离担孢子得到单核菌丝体,经紫外线诱变后进行配对杂交,通过镜检、拮抗试验以及利用玉米秸秆代料培养筛选高效利用秸秆的香菇新菌株,并对诱变杂交菌株的部分生物学特性进行研究.结果表明:试验所得香菇杂交菌株X2、X5、X6长势较好,其中,X6的产量比两亲本菌株高.

关键词:香菇;单核菌丝体;紫外线诱变;杂交;生物学特性

中图分类号:S646.1+20.33文献标识号:A文章编号:1001-4942(2015)02-0061-03

AbstractThe mononuclear mycelia were obtained from sporidia separated from fruiting bodies of two Lentinus edodes strains, Xianggu 8 and Xianggu L26. After mutagenized with ultraviolet radiation, they were hybridized. The Lentinus edodes strains utilizing stalk efficiently were screened out through microscopic examination, antagonism test and cultured with corn stalk, then some of their biological properties were studied. In the obtained strains, X2, X5 and X6 grew better, but X6 had the highest yield.

Key wordsLentinus edodes; Mononuclear mycelium; Ultraviolet mutagenesis; Hybridization; Biological properties

香菇(Lentinus edode)是一种药食两用菌,香气浓郁,肉质细腻可口,不仅营养价值高,而且药用价值和经济价值也很好.由于香菇属于木腐型真菌,代料栽培时对阔叶林木屑的消耗量很大,栽培成本高已成为当前阻碍香菇产业发展的一个重要因素.生产上,香菇培养料配方数十年来一直沿用78∶20∶1∶1的常规配方,新配方研究鲜见报道1.由于香菇属于白腐菌种,可产生木质素降解酶,故可尝试利用秸秆培育香菇2,3.我国是农业生产大国,农作物秸秆资源非常丰富,但由于木质素含量较高,严重影响了秸秆的降解和再利用.本研究采用紫外线诱变和杂交育种相结合的育种手段,选育适合在玉米秸秆代料培养基上生长的香菇新菌株,并对其部分生物学特性进行研究,以期为秸秆的有效利用及降低香菇培育成本提供一条新途径.

1材料和方法

1.1试验材料

1.1.1菌株香菇 8号和香菇L26, 由绥化学院食用菌研究所提供.

1.1.2培养基分离孢子所用培养基:酵母膏 3 g,蛋白胨 2 g,KH O4 0.46 g,K2HPO4 1 g,MgSO4 0.5 g,葡萄糖 20 g,琼脂 20 g,蒸馏水 1 000 mL,pH自然.

平板综合培养基:马铃薯 200 g(去皮),蛋白胨 5 g,麸皮 50 g,KH O4 3 g,MgSO4 1.5 g,葡萄糖 20 g,VB1 20 mg,琼脂 20 g,蒸馏水 1 000 mL,pH 自然.

秸秆筛选培养基:木屑20%、玉米秸秆粉68%、麦麸10%、蔗糖1%,CaSO4 1%,pH自然.玉米秸秆粉的制备:将玉米秸秆经晾干、除杂、切段(每段长约3 cm)、烘干、粉碎等预处理后过40目筛.

1.1.3试验仪器bl-50A型立式压力蒸汽灭菌器(上海东亚压力容器制造有限公司);SW-CJ-2F型超净工作台(苏州净化设备有限公司);HPX-9162MBE型恒温培养箱(上海博迅实业有限公司医疗设备厂);LRH-400-GSI型人工气候箱(韶关市泰宏医疗器械有限公司).

1.2试验方法

1.2.1单核菌丝的获得出发菌株(种菇)的处理4:适当切去种菇部分菌柄,子实体剩余部分用 75%酒精消毒处理后,置于灭菌的孢子采集装置中收集孢子.

孢子的分离5:用无菌水将收集到的孢子反复稀释至浓度为106个/mL,吸取适量孢子液注入孢子分离培养基上,涂布均匀后置于25℃恒温培养箱培养,约8~9 d后萌发孢子丝.

孢子丝的诱变:孢子丝萌发后,移置 30 W 紫外灯正下方 30 cm 处进行诱变.照射时间共设5个处理:0.5、2 、4、6、8 min,每个处理重复3次.诱变后立即用黑布包好,置于25℃恒温培养箱中继续培养.

单核菌丝的鉴定6:暗培养4 d左右,挑取边缘菌丝用显微镜观察鉴定.若未出现锁状联合现象,即可认为是单核菌丝,然后将其转接至斜面培养基上进行培养.观察单核菌丝的生长状况,培养12~14 d后,淘汰长势不理想的菌丝体,保留长势好的单核菌丝体作为亲本菌株用于杂交试验.

1.2.2配对杂交将筛选所得菌丝特性较好的菌株,两两配对接种于装有平板综合培养基的培养皿中,彼此相距1.0~1.5 cm.待培养 10~15 d后菌丝体接触,挑取接触处的菌丝镜检,出现锁状联合现象的即可认为为双核菌丝,说明杂交成功,然后转接到斜面培养基上,25℃恒温培养.

1.2.3拮抗试验在平板综合培养基的中间接种有效的杂交菌丝体,其两侧分别接种两亲本菌丝体,距离为2~3 cm,培养1个月后观察拮抗现象.由于同种菌丝间能够融合生长,相交处不会出现拮抗线,故只有在杂交后代和亲本菌丝间同时显示有两条黄褐色拮抗线时,此杂交后代为真正的杂合体7,8.

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