利用环介导等温扩增技术快速检测饮用水中大肠杆菌,此文是一篇大肠杆菌论文范文,为你的毕业论文写作提供有价值的参考。
大肠杆菌论文参考文献：
摘 要：本研究以饮用水为研究对象,利用大肠杆菌malB保守基因设计LAMP特异引物,通过优化反应条件,建立了适用于快速检测饮用水中大肠杆菌的LAMP方法,可在60℃条件下反应60 min完成检测,检测灵敏度达到1.35 CFU/mL.利用SYBR Green Ⅰ染料剂可在紫外灯下直接观察检测结果.通过检测掺入已知大肠杆菌的纯净水样品,结果表明,本研究所建立的LAMP方法具有特异性强、灵敏度高、操作简便的特点,可用于饮用水中大肠杆菌致病菌的快速检测,对预防和控制大肠杆菌的传染具有重要意义.
关键词：饮用水；环介导恒温扩增；大肠杆菌；快速检测
中图分类号：X832 文献标识号：A 文章编号：1001-4942（2017）01-0130-06
Abstract In this study, with the specific primers designed according to the conserved region of malB gene of Escherichia coli, a rapid method of loop-mediated isothermal amplification for detecting Escherichia coli in purified water was established through optimizing the reaction conditions. For one time detection, it could be completed at 60℃ in 60 minutes, and the detection sensitivity was 1.35 CFU/mL. The detection results could be observed under UV lamp with SYBR Green Ⅰ. By detecting the purified water samples incorporated with known Escherichia coli, the results showed that the established LAMP method owned advantages of strong specificity, high sensitivity and easy to operation. It was suitable for rapid detection of pathogenic Escherichia coli in purified water, and it had important significance for prevention and control of infection from Escherichia coli.
Keywords Purified water； Loop-mediated isothermal amplification； Escherichia coli；Rapid detection
大腸杆菌为革兰氏阴性菌,是人和其他温血动物肠道后段的常住菌,终生存在,一般不会对人机体造成伤害,但是在特殊情况下可引起机体的其他部位感染[1].致病性大肠杆菌中以O157∶H7对人致病性最强, 它属于EHEC（肠出血性大肠杆菌）, 像通常的致病菌一样产生细菌毒素, 可引发出血性结肠炎,出血性结肠炎可发展为溶血性尿毒综合征（HUS）和血小板减少性紫癜,严重者可发生死亡[2].随着人们对食品安全的广泛关注,大肠杆菌作为食源性疾病的主要致病菌之一,是病原检测的必要项目.食源性疾病病原检测技术是相关疾病预防和控制的关键.传统的检测方法主要是根据大肠杆菌的生化特征,进行前增菌、选择性增菌、镜检以及血清学验证[3].随着分子生物学技术的发展,相关病原快速检测方法也日新月异,目前主要包括常规PCR法[4]、基因芯片法[5]、实时荧光PCR方法[6]、多重PCR法[7]等,这些方法具有特异性强和灵敏度高的特点,但是需要较昂贵的仪器和专业的技术人员,试验成本也偏高,因此无法广泛推广应用.
环介导等温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）是一种新型的恒温核酸扩增技术,在等温条件下利用4种不同的特异性引物识别靶基因的6个特定区域进行扩增反应,基因的扩增和产物的检测可一步完成.应用LAMP方法检测食品中的大肠杆菌时有报道,Hill等[8]利用LAMP方法快速检测出大肠杆菌.苑宁等[9]利用LAMP方法检测牛肉中大肠杆菌的灵敏度为1.0 CFU/mL.杨文韬等[10]利用LAMP方法检测到牛乳中的大肠杆菌,在63℃下孵育60 min,最低检出限为547 CFU/mL.Harakudo等[11]利用LAMP方法在60 min内就能完成致病菌大肠杆菌的检测,灵敏度每个反应体系均大于0.7 CFU.但是在水中检测大肠杆菌的报道较少.刘莎等[12]利用LAMP方法对常规水质进行检测,灵敏度为每个反应体系10 CFU.另外,LAMP 扩增产物检测包括以下 3 种方式：（1）SYBR Green Ⅰ检测,在反应液中加入SYBR Green Ⅰ,可在紫外灯或日光下通过肉眼判定扩增结果,如果含有扩增产物,反应混合液变绿；反之,则混合液保持橙色；（2）副产物-焦磷酸镁的浊度检测,这种检测方式具有极高的特异性,使用浊度仪或肉眼观察就能够判断扩增和否；（3）琼脂糖电泳检测,因LAMP产物均为初始结构的整数倍,扩增产物经琼脂糖电泳后形成特异的梯状条带[6,7].
本研究利用大肠杆菌的malB基因设计LAMP特异引物,通过对反应温度、反应时间、dNTPs和甜菜碱浓度等条件进行优化,建立了快速检测饮用水中大肠杆菌的LAMP反应体系,为饮用水中重要致病菌的检测提供一种快速准确的技术手段.
结论：关于大肠杆菌方面的的相关大学硕士和相关本科毕业论文以及相关酵母菌论文开题报告范文和职称论文写作参考文献资料下载。
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